苹果砧木SH40 MdNCED1基因克隆与表达分析

摘要

9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶基因是脱落酸合成途径的关键基因。本试验通过RT—PCR结合RACE技术从苹果SH40（Malus domestica×Malus Honanensis）茎尖组织中克隆了1条NCED基因，命名为MdNCED1（GenBank登录号为KC816734）。该cDNA序列全长2179bp，包含1个编码606个氨基酸的开放阅读框。氨基酸同源性分析表明，MdNCED1与已报道的其他植物物种的氨基酸序列具有63．7％～93．0％的相似性。构建MdNCED1基因的原核表达载体pDEST15-MdNCED1，转入大肠杆菌（DE3），用IPTG诱导。SDS—PAGE分析表明，MdNCED1基因在大肠杆菌中被诱导表达的蛋白质分子量与预期结果一致。荧光定量结果表明，MdNCED1基因在SH28、M26、SH40及其嫁接品种嘎啦的表达趋势均呈先上升后下降的趋势，同时与其矮生程度呈正相关。