表达人NEP基因重组腺病毒载体的构建及其降Aβ作用的研究

摘要

目的构建携带人全长NEP基因的重组腺病毒载体,包装扩增获得高滴度病毒,检测其对损伤细胞的降β-淀粉样肽(Aβ)作用。方法构建含NEP基因的腺病毒穿梭载体pAdTrack-nep,并与骨架载体pAdEasy-l在细菌内重组为pAd-NEP,经293细胞包装为增殖缺陷性腺病毒,感染人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞。采用RT-PCR和Westernblot法分析检测NEP的表达水平及感染内源性损伤的SK-N-SH细胞(sweAPP-SK),采用Elisa法初步检测NEP对Aβ的降解程度。结果成功构建重组腺病毒AD-NEP和对照病毒AD-GFP,且重组腺病毒能感染人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞并检测到目的基因的高表达。Elisa结果显示,NEP高表达有明显减轻Aβ在细胞外累积的作用。结论利用细菌内质粒同源重组法可快速简捷地制备表达外源基因的腺病毒,感染AD-NEP的神经细胞通过NEP高表达可以明显减轻Aβ累积。