TLR2siRNA调控ox-LDL致损THP-1源性巨噬细胞Notch信号的表达

摘要

目的研究THP-1细胞转化的巨噬细胞中Notch信号通路成分对氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)作用下的应答变化,以及Toll样受体2小分子干扰RNA(toll like receptor 2 small interfering RNA,TLR2siRNA)对该应答的作用,为了解Notch信号在炎症反应及参与动脉硬化机制提供实验依据。方法将贴壁的THP-1细胞分为3组:(1)诱导组:采用50 mg/L ox-LDL刺激转化贴壁的THP-1源巨噬细胞;(2)转染组:采用50 mg/L ox-LDL刺激转化贴壁的THP-1源巨噬细胞+TLR2siRNA转染;(3)对照组:转化并贴壁的THP-1源巨噬细胞。采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)检测Notch信号通路受体、配体的表达,单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)mRNA,血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesive molecule 1,VCAM-1)mRNA的表达。将TLR2siRNA基因沉默后用Lipo2000转染THP-1源巨噬细胞,在ox-LDL作用下,qPCR分别检测TLR2siRNA转染的THP-1源巨噬细胞与未转染的THP-1源巨噬细胞的Notch信号成分及VCAM-1、MCP-1 mRNA表达。结果与对照组比较,加入ox-LDL后,THP-1源巨噬细胞表达Notch 1、DLL 4和Jagged 1表达明显升高(P<0.05),VCAM-1、MCP-1 mRNA的表达也明显升高(P<0.05);而接受TLR2siRNA转染后,可部分逆转上述ox-LDL对THP-1源巨噬细胞的致损活化效应。结论TLR2siRNA可抑制ox-LDL致损THP-1源巨噬细胞Notch信号通路各成分及VCAM-1与MCP-1 mRNA的表达上升。