防风乌梅含药血清对血小板衍生生长因子诱导气道平滑肌细胞迁移的影响

摘要

目的探讨防风-乌梅配伍对支气管哮喘气道重塑的影响及可能作用机制。方法 20只SD雄性大鼠随机分为正常组、防风组、乌梅组、防风乌梅组(防风∶乌梅=1∶1),每组5只。防风组、乌梅组、防风乌梅组分别给予相应生药15. 425、15. 425、30. 850 g/(kg·d)药液灌胃,正常组给予等量生理盐水灌胃,各组均每日3次。干预4天后制备含药血清。采用20 ng/ml血小板衍生生长因子诱导的方式促使人支气管平滑肌细胞(HBSMC)迁移模型。实验分为空白对照组、细胞模型组、正常血清组、正常血清细胞模型组、激素干预组、防风血清组、乌梅血清组、防风乌梅血清组,HBSMC以5×10^4/ml细胞密度接种于培养板,每组8个样本,各组加入10%相应血清干预,37℃、5%CO2培养。培养0、6、24 h时采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移率,培养48 h后采用跨膜迁移实验观察跨膜迁移细胞数,ELISA法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1 (TIMP-1)浓度,计算MMP-9/TIMP-1值。结果与空白对照组、正常血清组比较,细胞模型组、正常血清细胞模型组6 h、24 h时细胞迁移率升高,48 h时跨膜迁移细胞数亦升高,细胞上清液中MMP-9浓度、MMP-9/TIMP-1值升高,TIMP-1浓度降低(P <0. 05)。与细胞模型组、正常血清细胞模型组比较,防风乌梅血清组、激素干预组细胞上述各指标均显著改善,并且优于防风血清组和乌梅血清组(P <0. 05)。结论防风-乌梅配伍能显著抑制人支气管平滑肌细胞迁移而影响气道重塑,优于单独使用防风或乌梅,其机制可能与抑制MMP-9/TIMP-1值有关。