高盐激活氧化应激-p38丝裂原活化蛋白激酶-肌动蛋白骨架重组诱导血管内皮细胞损伤

摘要

目的探讨高盐对血管内皮细胞损伤的生物学作用及其机制。方法用含10%胎牛血清、0.45nmol/L醛固酮的杜尔伯科改良伊格尔培养基（DMEM）培养人主动脉内皮细胞3d,应用不同浓度NaCl（135、145、155mmol/L）及NaCl（135mmol/L）＋一氧化氮合酶抑制剂——左旋硝基精氨酸甲酯（l-NAME,1μmol/L）刺激内皮细胞3h。Rhodamin-Phalloidin检测内皮细胞纤维型肌动蛋白骨架（F-actin）分布;硝酸还原酶法/酶联免疫吸附试验（ELISA）分析法检测内皮细胞上清中一氧化氮及过氧化亚硝基阴离子（ONOO-）含量的变化;通过Western blot检测内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的亚基gp91、磷酸化p38（P-p38）、磷酸化HSP27（P-HSP27）的蛋白表达量。应用磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38 MAPK）特异性抑制剂SB203580（25μmol/L,1h）或氧化应激清除剂tempol（1mmol/L,1h）预处理内皮细胞后,检测盐负荷诱导内皮细胞骨架、细胞上清及蛋白表达的改变情况。结果当细胞外钠离子浓度为145-155mmol/L时,较135mmol/L时内皮细胞骨架F-actin增多,细胞上清中一氧化氮含量降低、ONOO-含量增加,且内皮细胞中磷酸化eNOS（P-eNOS）表达量降低,gp91、P-p38、P-HSP27表达量增加。预先给予氧化应激清除剂tempol后,可以缓解由盐负荷引起的内皮细胞损伤。预先给予SB203580后,可以部分缓解由盐负荷引起的内皮细胞损伤。结论高盐通过激活氧化应激及p38通路诱导F-actin重组,进而引起血管内皮细胞eNOS表达降低及一氧化氮释放减少。