二硫键异构酶TMX1促进肺癌化疗耐药

摘要

目的探讨内质网二硫键异构酶(PDI)在肺癌发生及化疗药物治疗中的作用。方法利用Human Protein Atlas软件数据库筛选在肺组织有表达的PDI家族成员;利用qRT-PCR技术对临床10例患者的肺癌及癌旁组织中的部分PDI家族成员mRNA水平差异进行分析,进一步利用免疫印迹技术对临床4~6例患者的肺癌及癌旁组织部分PDI家族成员的蛋白表达差异进行分析,并利用免疫组化技术进行验证,分析变化显著的差异基因与患者预后的关系,重点考察TMX1在肺癌发生发展中的作用。利用qRT-PCR、免疫印迹技术分析TMX1在肺癌细胞、肺癌多药耐药细胞及非肿瘤上皮细胞的转录和蛋白水平。通过脂质体转染构建过表达和敲低TMX1的细胞,利用MTT实验检测TMX1对肺癌细胞存活的影响,并分析TMX1对化疗药物顺铂和多西紫杉醇药效的影响。结果临床样本检测结果显示,与癌旁组织相比,肺癌组织中PDIA2的mRNA和蛋白水平降低,PDIA3、PDIA6、TMX1、TMX3的mRNA水平均明显升高。对TCGA数据库基因表达和预后关系分析结果显示,PDIA2、TMX1低表达者预后好;而PDIA6高表达时生存期略有延长,PDIA3、TMX3的表达高,生存期显著延长。对TMX1的功能进行基础表达分析,结果显示,相对于非肿瘤的上皮细胞,TMX1在不同类型肺癌细胞的转录水平都较高,但其蛋白表达在肺腺癌A549细胞、小细胞肺癌H446细胞中明显升高;发现TMX1在肺癌的耐药细胞中表达升高,敏感细胞经顺铂和多西紫杉醇处理后其表达上调。下调TMX1的表达,肺癌A549细胞存活减少,且对顺铂和多西紫杉醇的敏感性增加;而在低表达的H1688细胞中过表达TMX1,细胞的存活增加,对顺铂和多西紫杉醇更加耐受。结论TMX1能够促进肺癌细胞的存活并对顺铂和多西紫杉醇耐药。