大豆1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶基因启动子克隆与分析

摘要

根据已知的大豆1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylatesynt-hase,ACC合酶)基因序列(GenBank Accession No:dq273840)设计三个基因特异的反向引物CTA798sp1,CTA798 sp2,CTA798 sp3,分别与4个简并引物配对,通过热不对称PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)扩增,获得了该基因上游约600bp的序列。利用5'-cDNA末端快速扩增(5'Rapid Amplification of cDNA ENDs,5'-RACE)实验,确定转录起始位点(TTS)位于起始密码子上游164 bp处,由此获得了大豆ACC合酶基因上游长约328bp的启动子序列。用PLACE和PLANTCARE软件分析此序列,发现该序列具有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box;此外发现三个胁迫诱导元件:光应答元件Box1,Box4和诱导物应答元件W-box。以pBI121为基础,进一步构建了由ACC合酶基因上游调控序列启动的GUS基因植物表达载体,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草叶片,瞬时表达结果表明GUS基因在该片段的调控下获得了表达,该片段具有启动子活性。