藁本内酯对缺糖缺氧/复氧所致PC12细胞线粒体分裂的影响

摘要

该文旨在探讨川芎中主要活性成分藁本内酯对缺糖缺氧/复氧(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)致PC12细胞损伤时线粒体分裂的影响及机制。通过体外建立OGD/R模型,经藁本内酯预处理PC12细胞3 h后,采用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜下观察藁本内酯不同浓度组对OGD/R损伤后PC12细胞形态的影响;透射电镜下观察OGD/R损伤后PC12细胞线粒体分裂的情况。DCFH-DA免疫荧光染色法检测细胞内活性氧含量(reactive oxygen species,ROS)变化;流式细胞术检测线粒体膜电位(mitochondria membrane potential,MMP)变化,Hochest 33258观察PC12细胞凋亡情况;Western blot法检测线粒体和胞质中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)的含量变化,及线粒体分裂相关蛋白Drp 1及Fis 1的表达。结果显示,与模型组相比,藁本内酯可以增加PC12细胞的存活率,细胞数目明显增多,细胞形态较正常,呈簇状生长。进一步实验表明,藁本内酯可以抑制OGD/R损伤后PC12细胞内ROS的释放及线粒体膜电位的下降,减少Cyt C自线粒体至胞浆的释放,并促进线粒体分裂蛋白Drp 1和Fis 1的表达,促进了线粒体分裂。回复性实验表明,当给予线粒体分裂抑制剂mdivi-1后,抑制了线粒体分裂,同时细胞存活率显著下降,表明藁本内酯可以通过促进线粒体分裂抑制细胞损伤而发挥神经保护作用。初步证明藁本内酯抗缺血性脑损伤的作用机制可能与促进线粒体分裂,维持自身稳态有关。