麻疹核蛋白基因的表达及检测应用的研究

摘要

目的:构建麻疹病毒核蛋白基因的原核表达系统,使其在大肠杆菌中高效表达,并确定表达产物在麻疹抗体检测中的应用价值。方法:提取麻疹流行株基因组RNA,RT-PCR扩增核蛋白基因并克隆入T载体中,测序正确后亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;利用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白表达情况和免疫原性;通过Ni-NTA亲和层析获得的高纯度目的蛋白用于ELISA检测。结果:RT-PCR获得的核蛋白基因全长1578 bp。大肠杆菌表达产物在SDS-PAGE中出现大约62 kDa的特异条带,且主要以可溶性形式存在。West-ern blot显示表达的重组蛋白具有良好的抗原性。纯化的重组核蛋白成功地应用于麻疹IgG抗体的检测。结论:成功构建麻疹病毒核蛋白基因的原核表达系统,纯化的重组蛋白具有良好的抗原性,可用作麻疹抗体水平免疫检测的抗原。