雷公笋SRAP-PCR体系建立及有效引物筛选

摘要

为构建雷公笋最佳SRAP-PCR反应体系以及评价并筛选雷公笋SRAP引物的有效性,本研究通过单因素试验和正交试验相结合的方法,对模板DNA、dNTPs、引物及Taq DNA聚合酶4种影响雷公笋SRAP-PCR扩增结果进行分析。单因素试验结果表明:雷公笋基因组DNA浓度越高扩增效率越好,低浓度d NTPs利于扩增产物,而Taq DNA聚合酶和引物扩增高效率偏于中高浓度。正交试验结果表明:各因素对海南雷公笋SRAP-PCR扩增影响大小先后顺序分别为:引物=dNTPs>模板DNA>TaqDNA聚合酶;最优总体系为25μL时,4种影响扩增效率的因素最佳用量各为:模板DNA 100 ng、TaqDNA聚合酶6.40 U、dNTPs浓度0.12 mmol/L、引物浓度2.0μmol/L。利用SRAP-PCR最佳反应体系,从100对SRAP引物对中筛选出30对条带清晰的多态性引物,多态性比率平均值达到48.77%。研究结果可为海南雷公笋的遗传多样性分析、种质资源鉴定等研究提供参考依据。