肝豆扶木汤通过JAK/STAT信号通路对TX小鼠肾纤维化的干预作用

摘要

目的:研究肝豆扶木汤(GDFMT)对Wilson病肾纤维化小鼠的保护作用及其可能作用机制。方法:将60只成年雄性毒乳鼠(TX)随机分成模型组、GDFMT高、中、低剂量组、青霉胺组,另12只作为正常组的野生小鼠共6组。GDFMT高、中、低剂量组分别予以13.92、6.96、3.48 g·kg^(-1),青霉胺组0.1 g·kg^(-1),模型组及正常组使用等量0.9%氯化钠溶液灌胃,每天1次,连续给药4周。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中血尿素氮(BUN),肌酐(CRE),Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ),Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)的含量。苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色的小鼠肾的病理形态学改变。免疫荧光法测定肾细胞内瘦素(leptin)、Janus激酶2(JAK2)及信号传导及转录激活蛋白(STAT)蛋白表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定leptin、瘦素受体(OB-R)、JAK2及STAT mRNA的情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转化生长因子-β(1 TGF-β_(1))、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达情况。结果:与正常组比较,模型小鼠BUN、CRE、PC-Ⅲ、C-Ⅳ水平显著增加(P<0.01),与模型组比较,GDFMT高、中剂量组和青霉胺组含量明显降低(P<0.05,P<0.01),GDFMT高剂量组显著减少(P<0.01)。肾组织病理形态结果表明,模型组肾纤维组织增生,用药干预后肾组织病理损害不同程度减轻,纤维化改善。免疫荧光结果显示,模型组leptin、JAK2及STAT3蛋白肾纤维化高表达,GDFMT干预后,荧光强度降低,GDFMT高剂量组荧光强度最低。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型leptin、OB-R、JAK2、STAT3 mRNA表达水平明显升高,与模型组比较,GDFMT中、高剂量组及青霉胺组表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组TGF-β_(1)、MCP-1表达量显著上升(P<0.01),与模型组比较,GDFMT中、高剂量组表达水平显著降低(P<0.01)。结论:GDFMT可以减轻TX小鼠肾纤维化损伤,其机制可能是通过调控leptin及JAK/STAT信号通路表达有关。