PRMT5通过抑制NF-κB削弱DR4介导的趋化因子CCL20释放

摘要

构建表达DR4的质粒pCMV-DR4-HA(DR4)和表达PRMT5的质粒pCMV-PRMT5-Flag,共转染293T细胞,验证DR4和PRMT5的相互作用.将DR4和蛋白精氨酸N端甲基化转移酶5(protein arginine methyltransferase5,PRMT5)两种质粒分别或者共转染293T细胞,研究PRMT5对DR4引起的炎症因子释放的影响,探讨PRMT5抑制DR4(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor1)引起炎症因子释放的分子机制.分别通过RT-PCR和ELISA方法对炎症因子的表达进行定量检测.通过双荧光报告基因方法检测PRMT5对DR4引起NF-κB活性变化的影响,并且使用WesternBlot方法检测ERK的表达变化.DR4和PRMT5在293T细胞中能相互结合,PRMT5过表达降低了DR4引起的NF-κB活性和ERK的磷酸化,导致CCL20分泌减少.因此,PRMT5在293T细胞中与DR4结合,通过改变NF-κB和ERK激酶活性影响了CCL20的分泌,参与了DR4介导的细胞免疫调节.