羟丙基甲基纤维素在脐血干细胞分离中应用

摘要

目的 探讨羟丙基甲基纤维素在人脐血间充质干细胞（MSCs）分离中应用的可行性及分离效果。方法 对脐血样本先用生理盐水稀释,然后分别加入3种不同沉降因子（羟丙基甲基纤维素,明胶和羟乙基淀粉）,血液、生理盐水、沉降因子比例为2：1：3,混匀后静置至界面分层清晰时记录时间;用Percoll液对上清液进一步分离,计数回收MSCs量与存活数;将MSCs进行培养、传代,传到第3、20代及液氮冻存6个月后复苏再传至35代时用流式细胞仪检测CD44、CD90、CD105,CD34、CD45表达。结果 羟丙基甲基纤维素沉降红细胞速度最快,仅需15 min,明胶和羟乙基淀粉均需要30 min左右,差异具有统计学意义（P〈0.05）;0.1%~0.3%羟丙基甲基纤维素对脐血MSCs回收量在（6.24~6.72）×106个/m L,高于4%~8%羟乙基淀粉对脐血MSCs回收量[（5.12~6.88）×106个/m L）],明显高于0.3%~0.6%明胶对脐血MSCs回收量[（2.08~2.56）×106/m L）],差异均具有统计学意义（P〈0.05）;羟丙基甲基纤维素回收MSCs的存活率最高,高于明胶和羟乙基淀粉,差异具有统计学意义（P〈0.05）;用羟丙基甲基纤维素分离、培养的MSCs传到第3、20代及液氮冻存6个月复苏后传到第35代,CD44、CD90、CD105表达均呈阳性,CD34、CD45表达呈阴性,符合干细胞表面标志特征。结论 羟丙基甲基纤维素可以用于脐带血MSCs分离（最适宜浓度为0.2%）,效果优于常用的分离试剂明胶和羟乙基淀粉。