KPC型碳青霉烯酶基因荧光定量PCR快速鉴定

摘要

目的建立一种准确地鉴定肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因的方法。方法比对11种KPC型碳青霉烯酶基因,在保守区设计引物和探针,优化PCR反应体系,评价特异性、灵敏度和重复性,对样本分离株进行检测,通过测序、药敏实验等验证该方法的正确性。结果该方法可准确、特异地鉴定KPC型碳青霉烯酶基因,其他不携带该基因的菌株均无阳性结果;阳性质粒、纯培养细菌和模拟样本的灵敏度分别为10 copies/μL、10 CFU/mL和102CFU/mL;检测489株临床痰液样本分离菌,产KPC型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌阳性7例,大肠埃希菌阳性11例、枸橼酸杆菌阳性1例,与测序结果完全一致。结论荧光定量PCR法能准确、特异、快速地鉴定KPC型碳青霉烯酶基因,操作简便,可用于产KPC型碳青霉烯酶菌株的临床诊断及流行病学调查,同时,检测结果表明浙江地区目前以携带产KPC-2型碳青霉烯酶为主的菌株。