野生型及突变型高分子激肽原D5_H抑制肿瘤细胞转移的研究

摘要

目的探讨编码含有关键模序HGK的高分子激肽原(high molecular weight kininogen,HK)第5结构区域(D5H)的野生型与突变型的蛋白质对抑制肿瘤细胞转移能力的影响。方法利用PCR介导的定点突变技术分别将D5H的模序His485-Gly-Lys487中的每个氨基酸依次被Ala替代获得3个突变体。将这些突变体构建到p GEX-4T-1的表达载体上,并在大肠杆菌中进行融合蛋白的表达,利用亲和色谱纯化这些蛋白。通过细胞黏附、侵袭实验及免疫细胞化学SP法观察野生型与突变型GST-D5H融合蛋白对肿瘤细胞黏附及侵袭能力的影响。结果对抑制肿瘤细胞黏附能力的强弱顺序为:GST-D5H>GST-D5H(G486-A)>GST-D5H(H485-A)>GST-D5H(K487-A)。结论 Lys487是在D5H模序(His485-Gly-Lys487)中发挥生物学活性的关键氨基酸。