木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡

摘要

[目的]探究木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡的作用机制。[方法]通过CCK8法检测木香内酯对U87细胞增殖作用的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测木香内酯对U87细胞凋亡率的影响,采用JC-1染色法检测木香内酯对U87细胞线粒体膜电位的影响;采用DCFH-DA探针检测木香内酯对U87细胞中ROS含量的影响;采用生化法检测木香内酯对U87细胞氧化应激指标丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、微量还原型谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)含量的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测木香内酯对U87细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平的影响;采用分子对接寻找木香内酯与Caspase-3、Bax、Bcl-2的具体结合位点。[结果]木香内酯呈剂量依赖性抑制U87细胞的生长,细胞半抑制浓度IC_(50)为11.27μmol/L;细胞凋亡水平检测结果显示木香内酯20μmol/L组U87细胞凋亡率增加,差异具有统计学意义(P<0.001);线粒体膜电位水平检测结果显示木香内酯5μmol/L组、10μmol/L组、20μmol/L组U87细胞线粒体膜电位降低,差异具有统计学意义(P<0.001);氧化应激检测水平显示,木香内酯呈剂量依赖性上调U87细胞中ROS、MDA、NO水平;下调SOD、GSH水平,差异具有统计学意义(P<0.05);木香内酯20μmol/L组U87细胞Caspase-3、Bax mRNA表达水平均上调,差异具有统计学意义(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。分子对接结果显示木香内酯分别与Caspase-3、Bcl-2、Bax氨基酸残基ARG-164,LEU-168,ARG-66形成稳定的结合能。[结论]木香内酯能明显抑制U87细胞生长和介导细胞高氧化应激水平,降低线粒体膜电位并促进细胞凋亡。