补肾利湿法中药复方含药血清对痛风性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞NALP6信号转导通路调控作用机制的研究

摘要

目的从细胞水平探讨补肾利湿法中药复方含药血清对痛风性关节炎(GA)大鼠成纤维样滑膜细胞中嗜中性白细胞碱性磷酸酶6(NALP6)信号转导通路的调控作用。方法在大鼠成纤维样滑膜细胞培养基中加入尿酸钠微晶体刺激建立痛风性关节炎模型,将筛选出的最适合大鼠滑膜细胞生存的含药血清加入培养基中进行细胞实验。大鼠成纤维样滑膜细胞共分为空白组(正常滑膜细胞)、模型组(滑膜细胞+尿酸钠)和治疗组(滑膜细胞+尿酸钠+含药血清)3组,各组进行相应的干预。采用RT-PCR法检测滑膜细胞中NALP6 mRNA表达,Western blot法检测滑膜细胞中NALP6蛋白、核因子κB(NF-κB)蛋白、核因子κB抑制蛋白(IκB)表达,比色法检测滑膜细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)活性,ELISA法检测各组滑膜细胞中白介素-1β(IL-1β)含量的变化。结果与空白组比较,模型组中NALP6 mRNA的表达上调,NALP6、NF-κB蛋白表达上调,IκB蛋白表达下调,Caspase-1活性提高,IL-1β含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠成纤维样滑膜细胞中NALP6蛋白和mRNA表达显著抑制,NF-κB蛋白表达抑制,Caspase-1的活性抑制,IL-1β的含量降低,IκB蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补肾利湿法中药复方含药血清抑制“NALP6-Caspase-1-IL-1β”这一炎症信号转导通路,可能是其防治痛风性关节炎的重要机制之一。