一个棉花黄萎病抗菌肽基因25a2的克隆与表达

摘要

将棉花黄萎病抗菌肽A2的N端15个氨基酸序列在NCBI进行同源序列比较,根据同源蛋白的DNA序列设计引物,以解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)RS-25菌株基因组为模板,应用PCR扩增出一条约300 bp的DNA片段.序列分析表明,DNA片段长354 bp,编码117个氨基酸,将该基因命名为25a2.构建表达载体pET-28a-25a2,转化大肠杆菌(Eschrichia coli)BL21,37℃培养,应用终浓度为1 mmol·L-1的IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约15 kDa表达蛋白条带,与理论蛋白分子量相符.