理脾复方制剂含药血清对大鼠下丘脑神经元细胞瘦素、神经肽Y、八肽胆囊收缩素蛋白与基因的影响

摘要

目的观察理脾复方制剂含药血清对大鼠下丘脑神经元细胞瘦素(LP)、神经肽Y(NPY),八肽胆囊收缩素(CCK-8)等蛋白及基因的调控影响,探讨其治疗厌食的作用机制。方法50只大鼠随机分为对照组,低、中、高剂量理脾复方制剂组,硫酸锌组,每组10只。对照组灌胃给予等体积饮用水;硫酸锌组灌胃给予20 mg/kg硫酸锌口服溶液;低、中、高理脾复方制剂组分别灌胃给予2.4、4.8和9.8 g/kg理脾复方制剂,各组每日灌胃1次,连续7 d,末次灌胃后股动脉采血制备含药血清。体外培养大鼠下丘脑神经元细胞,MAP2免疫荧光鉴定细胞。采用CCK-8法筛选对照组、理脾复方制组(低、中、高剂量组),硫酸锌组在0、2、4、6、8、12、24、36、48 h对下丘脑神经元活性的影响,发现在24 h后时,各含药血清组对下丘脑神经元细胞活性开始增强并具有区别性。ELISA检测下丘脑神经元细胞上清液中LP、NPY、CCK-8的含量;Western Blot法及实时荧光定量PCR法分别检测下丘脑神经元细胞LP、NPY、CCK-8蛋白及基因相对表达量。结果细胞鉴定为下丘脑神经元细胞。与对照组比较,低、中、高剂量理脾复方制剂组中下丘脑神经元细胞上清液中LP、NPY、CCK-8含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);中、高剂量理脾复方制剂组下丘脑神经元细胞中LP、NPY、CCK-8蛋白相对表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);高剂量理脾复方制剂组下丘脑神经元细胞中LP基因相对表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量理脾复方制剂组下丘脑神经元细胞中NPY、CCK-8基因相对表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论理脾复方制剂治疗可能通过综合调节下丘脑神经元中LP、NPY、CCK-8蛋白及基因表达,实现改善厌食相关症状,但其影响作用与剂量呈负相关性。