1型糖尿病四跨膜蛋白7自身抗体检测技术的建立与应用

摘要

目的 建立四跨膜蛋白7自身抗体(TSPAN7A)的荧光素酶免疫共沉淀检测技术(LIPS),并评估TSPAN7A在中国1型糖尿病(T1D)人群中的应用价值.方法 将插入人全长四跨膜蛋白7 cDNA的海肾荧光素酶重组质粒转染293T细胞,获得含四跨膜蛋白7与海肾荧光素酶融合蛋白的细胞裂解液.待测血清与该细胞裂解液孵育过夜后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物,洗涤,加入海肾荧光素酶底物并检测荧光读数,以199名健康对照的第99百分位数作为阳性阈值.采用LIPS法检测2014至2017年中南大学湘雅二医院代谢内分泌科就诊的100例T1D患者[男64例,女36例,年龄(28±16)岁]、119例2型糖尿病(T2D)患者[男78例,女41例,年龄(47±12)岁]以及98名健康对照[男55名,女43名,年龄(28±12)岁]血清中TSPAN7A水平.同时采用放射配体法(RLA)检测谷氨酸脱羧酶自身抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)、锌转运体8自身抗体(ZnT8A)水平,初步评估TSPAN7A的临床应用价值.结果 100例T1D患者中GADA、IA-2A、ZnT8A、TSPAN7A的阳性率分别为72.0％、40.0％、29.0％、25.0％,经Bonferroni法校正后,TSPAN7A 阳性率低于GADA(P＜0.001),而与IA-2A(P=0.035)和ZnT8A比较差异无统计学意义(P=0.630).T1D患者TSPAN7A阳性率高于T2D 的0.84％(1/119;25.0％比0.84％,P＜0.001)和健康对照的1.02％(1/98;25.0％比1.02％,P＜0.001).在其他抗体基础上联合检测TSPAN7A可使T1D抗体阳性检出率由82.0％提高至85.0％.TSPAN7A阳性T1D患者与其他3种胰岛自身抗体阳性者临床特征差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 本研究成功建立了TSPAN7A的荧光素酶免疫共沉淀检测技术,TSPAN7A是中国T1D人群的一种新型胰岛抗体.