长链非编码RNA F19对小鼠创伤性脑损伤后继发性脑损伤的影响

摘要

目的 探讨长链非编码RNA F19（lncRNA F19）对小鼠创伤性脑损伤（TBI）后继发性脑损伤的影响。方法 （1）96只野生型C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、假手术＋空载病毒组、假手术＋lncRNA F19慢病毒组、TBI组、TBI＋空载病毒组及TBI＋lncRNA F19慢病毒组,每组下设TBI后1 d和3 d两个亚组,各亚组8只。检测lncRNA F19表达情况及沉默效率。（2）将96只野生型C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI＋空载病毒组及TBI＋lncRNA F19慢病毒组,每组下设TBI后1 d和3 d两个亚组,各亚组16只。观察lncRNA F19对TBI后神经元凋亡的影响。采用控制性皮层损伤法（CCI）建立小鼠TBI模型。F19慢病毒及空载病毒为造模前5 d经侧脑室注射。伤后1 d,3 d,采用实时定量PCR（qRT－PCR）法检测lncRNA F19相对表达量（2－ΔΔct）；Western blot法检测脑组织Toll样受体4（TLR4）、B淋巴细胞瘤－2（Bcl－2）及Bcl－2相关X蛋白（Bax）蛋白表达；TUNEL染色检测创伤灶周围神经元凋亡情况。结果 从伤后第1天开始,无论是假手术还是TBI后,空载病毒对lncRNA F19的表达无影响（P＆0.05）。伤后第1天,与假手术＋空载病毒组比较,假手术＋lncRNA F19慢病毒组脑组织lncRNA F19表达量明显下降（0.07±0.07 ∶ 0.93±0.17） ,与TBI＋空载病毒组比较,TBI＋lncRNA F19慢病毒组脑组织lncRNA F19表达量明显下降（2.91±1.18∶0.52±0.32）（P均＆0.05）。与TBI＋空载病毒组比较,TBI＋lncRNA F19慢病毒组脑组织TLR4 （0.51±0.13∶0.66±0.15）、Bax （0.45±0.06∶0.67±0.16）蛋白相对表达量及TUNEL神经元凋亡比例[（23.55±6.85）%∶（31.58±7.52）%]均明显降低（P＆0.05）,Bcl－2蛋白相对表达量（0.76±0.16∶0.47±0.12）明显升高（P＆0.05）。伤后第3天,与假手术＋空载病毒组比较,假手术＋lncRNA F19慢病毒组脑组织lncRNA F19表达量明显下降（0.11±0.09∶0.96±0.09）,与TBI＋空载病毒组比较,TBI＋lncRNA F19慢病毒组脑组织lncRNA F19表达量明显下降（0.54±0.24∶3.39±0.90）（P均＆0.05）。与TBI＋空载病毒组比较,TBI＋lncRNA F19慢病毒组脑组织TLR4 （0.60±0.20∶0.85±0.09）、Bax（0.60±0.12∶0.88±0.21）蛋白相对表达量及TUNEL神经元凋亡比例[（29.10±7.37）%∶（39.22±10.64）%]均明显降低（P＆0.05）,Bcl－2蛋白相对表达量（0.66±0.12∶0.35±0.16）明显升高（P＆0.05）。结论 抑制lncRNA F19可有效减少小鼠TBI后TLR4介导的皮层神经元凋亡,从而减轻继发性脑损伤。