兔耳郭软骨细胞的分离培养与鉴定

摘要

背景:基于3D打印支架材料的耳郭畸形再造是近年来的研究热点,而软骨细胞在支架上能否正常生长是其关键问题.目的:通过探讨兔耳郭软骨细胞的原代培养方法,为软骨细胞与组织工程学结合的应用奠定坚实基础.方法:采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法获取兔耳郭软骨细胞,体外培养并传代.通过不同传代细胞的形态学观察、生长曲线绘制、番红O-固绿染色、甲苯胺蓝染色、维多利亚蓝染色及糖胺多糖表达水平测定,对软骨细胞进行鉴定.结果 与结论:①倒置相差显微镜观察耳郭软骨细胞正常形态为梭形及多角形,传代培养6代以后成明显长梭形,且增殖速度明显减缓甚至停滞;②生长曲线绘制显示软骨细胞第2-5代均能稳定成直线增殖趋势;③番红O-固绿染色显示兔耳郭软骨细胞的细胞核结构和细胞质结构清晰,具有良好的形态学特征;④甲苯胺蓝染色提示软骨基质在培养初期分泌较少,随着细胞融合的增多而逐渐增加;⑤维多利亚蓝染色显示软骨细胞有胶原纤维生成,提示其具有正常功能;⑥糖胺多糖表达水平测定显示软骨细胞有特异性糖胺多糖的分泌;⑦实验成功建立了兔耳郭软骨细胞原代培养的分离和鉴定体系,获得了具有生物活性、可以进一步运用于组织工程学研究的耳郭软骨细胞.