芍药苷对脂多糖干预骨髓间充质干细胞的作用机制

摘要

背景:骨髓间充质干细胞在组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面具有强大的应用前景,有效提升骨髓间充质干细胞移植存活率与治疗效果成为研究热点.目的:探讨芍药苷对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移能力以及对脂多糖干预下骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、ERK1/2表达的影响.方法:CCK-8实验检测不同浓度芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖作用,划痕实验检测10μmol/L芍药苷对骨髓间充质干细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR检测10μmol/L芍药苷干预后骨髓间充质干细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67 mRNA表达量.将骨髓间充质干细胞分为对照组、脂多糖组(1 mg/L)、脂多糖+芍药苷组(1 mg/L脂多糖+80μmol/L芍药苷),干预72 h后荧光定量PCR、蛋白免疫印迹检测细胞中转化生长因子β1、ERK1/2(MAPK3/1)基因与蛋白表达水平,免疫荧光法对骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1蛋白进行定位与半定量分析.结果 与结论:①一定浓度(6.25-12.5μmol/L)芍药苷能促进骨髓间充质干细胞增殖;②与对照组比较,10μmol/L芍药苷组空白划痕面积缩小,差异有显著性意义(P<0.05);③与对照组比较,10μmol/L芍药苷组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67 mRNA相对表达量上调,差异有显著性意义(P<0.01);④脂多糖刺激后骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、MAPK1、MAPK3 mRNA表达量与转化生长因子β1、p-ERK1/2蛋白表达量上调,差异有显著性意义(P<0.01),芍药苷与脂多糖联合干预后,上述基因与蛋白表达量降低,差异有显著性意义(P<0.01);⑤实验结果表明,芍药苷能促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移以及损伤修复相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ki67表达,下调脂多糖干预的骨髓间充质干细胞中转化生长因子β1、ERK1/2(MAPK3/1)基因与蛋白表达.