长链非编码RNA MEG3对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的调控

摘要

背景:椎间盘髓核细胞损伤是引起椎间盘退行性病变的重要原因之一,长链非编码RNA在椎间盘退行性病变中的作用机制尚未阐明.目的:探讨长链非编码RNA MEG3对大鼠椎间盘髓核细胞增殖、凋亡的影响及其对磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的调控作用.方法:原代培养大鼠椎间盘髓核细胞,使用白细胞介素1β处理细胞建立模型,实验设置对照组、白细胞介素1β组、白细胞介素1β+pcDNA组、白细胞介素1β+pcDNA-MEG3组、白细胞介素1β+pcDNA-MEG3+LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂)组.实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA MEG3的表达量;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测增殖标记蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原、Bax、活化半胱氨酸蛋白酶3、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的表达量.结果与结论:①与对照组比较,白细胞介素1β组细胞中MEG3的表达量显著降低(P<0.05),细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Ki-67、增殖细胞核抗原、p-PI3K、p-Akt蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax、活化半胱氨酸蛋白酶3蛋白水平显著升高(P<0.05);②与白细胞介素1β+pcDNA组比较,白细胞介素1β+pcDNA-MEG3组细胞活力显著升高(P<0.05),Ki-67、增殖细胞核抗原、p-PI3K、p-Akt蛋白水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax、活化半胱氨酸蛋白酶3蛋白水平显著降低(P<0.05);③与白细胞介素1β+pcDNA-MEG3组比较,白细胞介素1β+pcDNA-MEG3+LY294002组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Ki-67、增殖细胞核抗原蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax、活化半胱氨酸蛋白酶3蛋白水平显著升高(P<0.05);④提示MEG3过表达可能通过激活PI3K/Akt信号通路从而促进白细胞介素1β诱导的大鼠椎间盘髓核细胞增殖,并抑制细胞凋亡.