骨关节炎Ⅰ号方预防氢化可的松对兔软骨细胞的损伤作用(英文)

摘要

背景:骨关节炎Ⅰ号方中的补肾活血祛风湿中药具有治疗骨关节炎、预防糖皮质激素副作用的作用。目的:建立体外兔关节软骨细胞培养体系,观察骨关节炎Ⅰ号方预防氢化可的松对软骨细胞的损伤作用。设计:完全随机设计,对照实验。单位:福建省第二人民医院风湿免疫科。材料:实验于2003-11/2004-03在福建中医学院骨伤系分子实验室完成。关节炎Ⅰ号方由仙灵脾、巴戟天、川芎、三七、祖师麻组成。用胶原酶Ⅱ消化兔关节软骨,建立软骨细胞体外培养体系,在软骨细胞培养体系中分别加入不同浓度的骨关节炎Ⅰ号方与氢化可的松的混合液,根据加入的药物浓度不同随机分成2组,一组加入1.25g/L氢化可的松和/或150g/L骨关节炎Ⅰ号方,另一组加入2.50g/L氢化可的松和/或300g/L骨关节炎Ⅰ号方。每组再分为4个亚组,各组再分别分为对照组、氢化可的松组、氢化可的松+关节炎Ⅰ号方组、关节炎Ⅰ号方组,每组5孔。方法:①1.25g/L氢化可的松+150g/L关节炎Ⅰ号方组:每孔分别加入1.25g/L氢化可的松和150g/L骨关节炎Ⅰ号方混合液0.1mL。②1.25g/L氢化可的松组:每孔分别加入磷酸盐缓冲液和1.25g/L氢化可的松的混合液0.1mL。③150g/L骨关节炎Ⅰ号方组:每孔分别加入150g/L骨关节炎Ⅰ号方药液0.1mL。④对照组1:每孔分别加入磷酸盐缓冲液0.1mL。⑤2.50g/L氢化可的松+300g/L骨关节炎Ⅰ号方组:每孔分别加入2.50g/L氢化可的松和300g/L骨关节炎Ⅰ号方的混合液0.1mL。⑥2.50g/L氢化可的松组:每孔分别加入磷酸盐缓冲液和2.50g/L氢化可的松的混合液0.1mL。⑦300g/L骨关节炎Ⅰ号方组:每孔分别加入300g/L骨关节炎Ⅰ号方药液0.1mL。⑧对照组2:每孔分别加入磷酸盐缓冲液0.1mL。⑨上述各组加药培养24h后,用倒置显微镜观察各组软骨细胞形态变化。⑩采用四氮唑蓝比色法检测各孔软骨细胞的A值,以反映软骨细胞增殖情况。主要观察指标:骨关节炎I号方与氢化可的松联合用药对兔软骨细胞增殖的影响。结果:①软骨细胞形态:倒置显微镜观察见对照组软骨细胞呈多角形或梭形贴壁生长,1.25和2.50g/L氢化可的松浓度培养24h的软骨细胞呈固缩或漂浮状态,各浓度氢化可的松+骨关节炎I号方组、骨关节炎I号方组的软骨细胞呈多角形或梭形贴壁生长与对照组无差异。②软骨细胞A值:1.25g/L氢化可的松组明显低于对照组1(0.0076±0.0018,0.0152±0.0026,t=5.3740,P<0.01);1.25g/L氢化可的松+150g/L关节炎Ⅰ号方组和150g/L关节炎Ⅰ号方组明显高于1.25g/L氢化可的松组(0.0656±0.0169,0.0866±0.0190,t=7.6309,9.2559,P<0.01);2.50g/L氢化可的松组明显低于对照组2(0.0053±0.0014,0.0153±0.0023,t=8.3045,P<0.01);2.50g/L氢化可的松+300g/L关节炎Ⅰ号方组和300g/L关节炎Ⅰ号方组明显高于2.50g/L氢化可的松组(0.0858±0.0150,0.0926±0.0168,t=11.9483,11.5794,P<0.01)。结论:高浓度氢化可的松可导致软骨细胞已严重损伤或死亡,而氢化可的松加中药培养的软骨细胞生长良好,骨关节炎Ⅰ号方有预防氢化可的松对软骨细胞的损伤作用。