大鼠脊髓损伤后肾上腺髓质素的表达及重组人红细胞生成素的干预作用

摘要

目的:观察肾上腺髓质素在大鼠脊髓损伤组织中的表达,并分析重组人红细胞生成素的干预作用。方法:实验于2005-06/10在协和医院骨科中心实验室完成。选择70d健康SD大鼠54只,随机数字法分为假手术组、脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组3组。采用Allen’sWD法-自制圆柱状金属棒沿细玻璃导管垂直自由落下,制成大鼠急性脊髓损伤动物模型,金属棒重量8.5g,高度5cm,损伤能量8.5×5(g·cm)。重组人红细胞生成素组损伤后1,3,5,7,9d分别给予600U/kg重组人红细胞生成素尾静脉注射。脊髓损伤模型组损伤后相同时间点给予等量的生理盐水。假手术组只切除椎板暴露脊髓。损伤动物模型以摆尾反射,双下肢对称性抽搐为成功标志。分别在术后3,6和11d采用改良Tarlov评分并改良Rivlin与Tator斜板法评分进行运动功能评定,每个时间点6只。苏木精-伊红染色观察脊髓损伤情况。免疫组化染色观察肾上腺髓质素的表达。结果:54只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠脊髓损伤情况:假手术组各时间点取材无明显异常。脊髓损伤模型组伤后3d,灰质内出现大量红细胞,神经元细胞肿胀呈圆形,大量核固缩、核碎裂,灰白质交界消失,灰质内空洞形成;伤后6d,红细胞融合成团,灰白质交界较清楚,残存神经元明显减少,轻微肿胀,仍见少量中性粒细胞,11d灰白质交界清楚,残存神经元形态基本正常。重组人红细胞生成素组各时间点病理变化明显轻于脊髓损伤模型组。②肾上腺髓质素的表达:肾上腺髓质素表达主要位于神经元中,假手术组各时间点肾上腺髓质素低表达,各时间点灰度值差异无显著性意义;脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组神经元数量较假手术组减少,肾上腺髓质素表达增强,重组人红细胞生成素组最强。伤后6,11d均恢复到正常表达。脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组3d的灰度值均高于假手术组,重组人红细胞生成素组灰度值高于脊髓损伤模型组,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。③改良Tarlov评分结果:脊髓损伤模型组及重组人红细胞生成素组3,6,11d的改良Tarlov评分均显著低于假手术组相同时间点评分(P<0.01);重组人红细胞生成素组3,6,11d改良Tarlov评分均高于脊髓损伤模型组相同时间点的评分(P<0.05)。④改良Rivlin与Tator法评分结果:脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组3,6,11d改良Rivlin与Tator法评分均显著低于假手术组相同时间点评分,差异有非常显著性意义(P<0.01);重组人红细胞生成素组3,6,11d改良Rivlin与Tator法评分均高于脊髓损伤模型组相同时间点的评分,差异有非常显著性意义(P<0.01)结论:急性脊髓损伤后肾上腺髓质素表达代偿性增高,肾上腺髓质素参与了脊髓损伤的发生发展过程并在其中起着抗氧化作用,重组人红细胞生成素能够减轻脊髓的继发性损伤,其治疗作用的机制之一可能是通过促进肾上腺髓质素表达增高而实现的。