地塞米松在家兔脂肪基质干细胞定向诱导为成骨细胞的作用

摘要

目的:观察不同浓度地塞米松对家兔脂肪基质干细胞生长、增殖及向成骨细胞分化的影响。方法:实验于2006-11/2007-01在南方医科大学组织工程研究中心完成。实验材料:成年新西兰大白兔购于南方医科大学实验动物中心(机构许可证号SYXK(粤)2005-0056)。实验方法:①脂肪基质干细胞获取:取成年新西兰大白兔腹股沟皮下脂肪组织一二毫升,分离培养脂肪基质干细胞,并按1∶3进行传代培养。选取生长良好的P3代细胞进行免疫组织化学染色测定CD44抗原表达。并于第3,7,14天观察细胞增殖情况。②脂肪基质干细胞成骨诱导:成骨诱导液由不同浓度地塞米松、50mg/L的维生素C、10mmol/L的β-磷酸甘油和DMEM完全培养基组成。实验分6组:0mol/L地塞米松组、10-8mol/L地塞米松组、10-7mol/L地塞米松组、10-6mol/L地塞米松组、10-5mol/L地塞米松组、对照组。选择生长良好P3代兔脂肪基质干细胞,用0.25%胰酶消化3～5min,制成单细胞悬液,调整细胞密度为1×104,接种于25cm2的培养瓶中,在体积分数为0.05的CO2饱和湿度、37℃恒温培养箱培养。24h后所有诱导组更换为成骨诱导培养液,进行成骨细胞诱导分化处理,记为诱导第0天,对照组换DMEM完全培养液。诱导期间,每隔二三天换1次成骨诱导液,对照组换1次常规DMEM完全培养液。③第7,14,21天茜素红染色鉴定成骨细胞特性,观察不同浓度地塞米松对兔脂肪基质干细胞的生长、增殖及向成骨细胞分化的影响。结果:①地塞米松对脂肪基质干细胞增殖的影响:与对照组相比较,10-6,10-5mol/L组细胞数目明显减少(t=2.8623,3.4245,3.5203,3.9594,2.2641,2.7012,P0.05),但钙化结节数目明显多于10-8mol/L组(t=5.4960,6.2811,6.3640,P10-7mol/L高浓度地塞米松对脂肪基质干细胞的生长、增殖有明显抑制作用;在其他诱导条件一致的情况下,10-7mol/L地塞米松最有利于脂肪基质干细胞向成骨细胞分化。