Taqman探针定量检测ICOS/ICOSL基因表达的方法

摘要

背景:近年来可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)/可诱导共刺激分子配体(ICOS Ligand,ICOSL)在抗感染、抗移植反应、抗肿瘤、治疗自身免疫性疾病等多方面领域受到了越来越多的关注。目前对ICOS/ICOSL表达量的研究大多基于分子水平,国内外尚鲜见ICOS/ICOSLmRNA定量检测的报道。目的:构建ICOS/ICOSLcDNA质粒标准品,建立Taqman探针检测ICOSL/ICOSL基因表达量的方法。方法:以胃腺癌组织总RNA为模板、Random9mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板聚合酶链反应扩增人ICOS/ICOSL基因相应的cDNA目的片段,构建PMD-18-ICOS/ICOSL重组质粒,鉴定测序后,用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链反应制作标准曲线。结果与结论:组织提取的总RNA完整性良好,构建的ICOS/ICOSL质粒测序结果与目的片段一致,质粒的原始浓度为6.10×1013,4.31×1013copies/mL,倍比稀释后用Taqman探针荧光定量聚合酶链反应检测,在1012～1013copies/mL线性关系良好(R2=1),提示成功建立了Taqman探针定量检测ICOS/ICOSL基因表达的方法。