落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇信号通路的影响

摘要

目的探讨落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI-3K/PKB）信号传导通路的影响。方法分离BALB/C小鼠心肌细胞（2×105/ml）和C57BL/6小鼠的脾细胞（1×106/ml）,前者作刺激细胞,后者作反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;3个实验组在对照组基础上,落新妇甙组加入落新妇甙（15μg/ml）;落新妇甙加PI3K激动剂组加入落新妇甙（15μg/ml）和PI3K激动剂IL-8（20μg/ml）;落新妇甙加PI3K抑制剂组加入落新妇甙（15μg/ml）和PI3K抑制剂LY294002（20μmol/L）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。Western blot法检测T细胞PI3K和Bcl-2蛋白表达情况。RT-PCR法检测T细胞PKB mRNA表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组[（74.2±11.17）%对（34.2±9.6）%,P＜0.01],PI3K、PKB、Bcl-2表达显著低于对照组（P＜0.01）。落新妇甙加PI3K抑制剂组T细胞凋亡指数显著高于落新妇甙组,PI3K、PKB、Bcl-2显著低于落新妇甙组（P＜0.01）。落新妇甙加PI3K激动剂组T细胞凋亡指数和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论落新妇甙诱导心脏移植效应性T细胞凋亡与其抑制PI-3K/PKB信号通路有关。