牙龈卟啉单胞菌超声提取物对小鼠成骨细胞骨向分化蛋白表达的影响

摘要

目的研究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）W83超声提取物对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14（MC3T3-E1）骨向分化相关蛋白表达的影响,探讨Pg超声提取物对细胞成骨功能的作用。方法标准厌氧环境下培养PgW83,收集细菌沉淀,离心后制备细菌的超声提取物,然后以0（对照组）、10、100及1000 mg/L的质量浓度加入MC3T3-E1的成骨诱导分化培养基中,培养14 1后提取细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测细胞骨钙蛋白、骨涎蛋白、骨桥蛋白及骨粘连蛋白的表达改变,酶标仪法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的表达;培养21 d后茜素红染色观察MC3T3-E1矿化结节形成情况;以上实验均重复3次,应用SPSS 13.0统计软件对各组结果进行单因素方差分析,检验水准为双侧α=0.05。结果 Pg超声提取物作用于MC3T3E1 14 d后,100 mg/L实验组细胞表达骨粘连蛋白、骨钙蛋白的相对表达量（分别为0.141±0.023、0.625±0.451）均显著低于对照组（均为1.000±0.000）和10 mg/L组（分别为1.035±0.133、0.852±0.1 10）;1000 mg/L组细胞表达骨粘连蛋、骨钙蛋白的相对表达量（分别为0.020±0.003、0.213±0.053）均显著低于对照组、10及100 mg/L组（P＜0.05）,Pg超声提取物呈剂量依赖性显著下调骨粘连蛋白和骨钙蛋白的表达。1000 mg/L高浓度时,Pg超声提取物显著下调骨桥蛋白的表达（蛋白相对表达量为0.572±0.162）,与对照组、10及100 mg/L实验组相比骨桥蛋白表达（分别为1.000±0.000、1.029±0.135、1.199±0.337）差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pg超声提取物不改变骨涎蛋白的表达,对照组、10、100及1000 mg/L组间骨涎蛋白的相对表达量（分别为1.000±0.000、0.831±0.182、0.897±0.115、0.778±0.235）差异无统计学意义（P＞0.05）。Pg超声提取物抑制MC3T3-E1的ALP活性,其抑制作用随各实验组质量浓度的增加逐渐增强,10、100、1000 mg/L质量浓度组ALP活性[分别为（0.0140±0.0011）、（0.0057±0.0013）及（0.0020±0.0008）U/gprot]均显著低于对照组[（0.0275±0.0014）U/gprot]（P＜0.05）,同时Pg超声提取物作用于MC3T3-E1 211后能明显抑制MC3T3-E1矿化结节的形成。结论 Pg超声提取物可以下调小鼠成骨细胞骨向分化蛋白的表达,抑制细胞的成骨功能。