无翅型MMTV整合位点家族成员3在大鼠牙囊及牙囊细胞成骨分化中的表达

摘要

目的研究无翅型MMTV整合位点家族成员3（wingless-type MMTV integration sitefamily,member 3,Wnt3）在大鼠体内外牙囊中的表达,检测成骨诱导后Wnt3在大鼠牙囊细胞中的表达变化,探讨Wnt3在牙囊成骨分化中的作用。方法取出生后1、3、5、7、9、11、13 d的SD仔鼠各1只,引颈处死,切取下颌骨,取出生后各时间点的组织切片各3张作为实验组,阴性对照组以磷酸盐缓冲液代替一抗,滴加在出生后11 d的组织切片上,其余处理同实验组。免疫组化检测Wnt3在大鼠体内牙囊中的表达。间接免疫荧光检测Wnt3在牙囊细胞内的表达和分布。茜素红染色检测成骨诱导后矿化结节的形成。蛋白质印迹法检测成骨诱导1、2、3周后牙囊细胞中Wnt3和β-联蛋白（β-catenin）表达的变化。结果 Wnt3在出生后第1、3天的大鼠牙囊组织内无明显表达,第5天开始出现阳性表达,并持续表达至第13天。免疫荧光检测显示Wnt3在牙囊细胞胞质中表达。成骨诱导后牙囊细胞分化为成骨细胞,形成矿化结节,茜素红染色阳性。成骨诱导第1周Wnt3蛋白表达（2.60±0.04）较阴性对照组（1.00±0.00）显著增加（P＜0.05）,并随着诱导时间的延长Wnt3表达逐渐减少,至第3周Wnt3在成骨诱导组表达水平（1.00±0.05）与阴性对照组基本相等,差异无统计学意义（P＞0.05）。β-联蛋白在成骨诱导1、2、3周后表达增加（分别为1.95±0.05、9.77±0.65、1.75±0.21）,与阴性对照组（1.00±0.00）相比差异均有统计学意义（P＜0.05）,并在第2周达峰值（9.77±0.65）,后逐渐降低。结论 Wnt3在体内外大鼠牙囊中表达,成骨诱导早期牙囊细胞中Wnt3表达明显增加,提示Wnt3可能参与牙囊细胞的早期成骨向分化;Wnt3和β-联蛋白在成骨诱导过程中表达水平的差异提示Wnt3可能与其他因子或信号通路成分相互作用,调控β-联蛋白的表达,参与牙囊细胞的成骨向分化。