富血小板纤维蛋白对人牙龈成纤维细胞增殖、迁移和分泌Ⅰ型胶原的影响

摘要

目的体外研究富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin,PRF）对人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,HGF）增殖、迁移和Ⅰ型胶原表达能力的影响。方法采用组织块培养法原代培养人牙龈成纤维细胞,采用Choukroun的方法制备PRF,将自体PRF与HGF共培养,分为PRF1组（含1片PRF膜）、PRF2组（含2片PRF膜）和空白对照组,每组设6个复孔,共培养1、3、5 d后,甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测细胞毒性及增殖水平;酶联免疫吸附测定法检测培养上清液中Ⅰ型胶原的分泌水平;制备PRF膜浸出液,分为PRF1组、PRF2组和空白对照组,每组设6个复孔,Transwell系统检测PRF膜浸出液对HGF迁移的作用。结果细胞增殖实验显示,第1、3、5天PRF1组4值（0.615±0.036、0.686±0.006、0.693±0.004）和PRF2组A值（0.653±0.023、0.766±0.034、0.775±0.053）均显著高于空白对照组（0.514±0.020、0.544±0.006、0.545±0.009）（P＜0.01）,PRF1组和PRF2组A值差异无统计学意义（P＞0.05）;各组内不同时间点间相比,随时间递增A值均显著增高（P＜0.01）。细胞迁移实验显示,PRF1组和PRF2组细胞迁移数[分别为（85.67±2.94）、（85.83±1.47）]均显著高于空白对照组（54.17±2.48）（P＜0.01）;PRF1组和PRF2组细胞迁移数差异无统计学意义（P＞0.05）;细胞分泌Ⅰ型胶原实验显示,第1、3、5天PRF1组A值（0.184±0.004、0.200±0.004、0.204±0.009）和PRF 2组A值（0.213±0.008、0.226±0.005、0.229±0.006）均显著高于空白对照组（0.174±0.002、0.184±0.002、0.186±0.003）（P＜0.01）,PRFl组和PRF2组A值差异无统计学意义（P＞0.05）;各组内不同时间点间相比,随时间递增A值均显著增高（P＜0.01）。结论 PRF对HGF的生物学行为具有显著促进作用,PRF与种子细胞HGF相结合,在治疗牙龈退缩及牙周组织工程中具有较大的临床应用潜能。