外源性Hedgehog抑制剂诱导小鼠口下颌-肢体发育不全模型建立的效果观察

摘要

目的观察Hedgehog抑制剂（GDC-0449）在胚胎发育期间对胎鼠的致畸作用,建立GDC-0449诱导口下颌-肢体发育不全动物模型,为进一步研究其发病机制提供基础。方法将27只孕鼠按随机数字表法分为1个对照组和8个给药组,每组3只。8个给药组分别在胚胎发育的不同时间点,胚胎8.5 d（embryonic day 8.5,E8.5）、E9.5、E10.5、E11.5、E12.5、E13.5、E14.5及E15.5给予孕鼠单次灌胃150 mg/kg GDC-0449,于E 16.5获取孕鼠胚胎,通过体视镜和HE染色观察胎鼠的颅面部和四肢的畸形情况,从中选取与口下颌-肢体发育不全综合征临床表现极为相似的给药组为最佳给药组。确定最佳给药组后重新取6只孕鼠,按随机数字表法分为对照组和最佳给药组,每组3只,于E18.5取孕鼠胚胎,通过阿尔新蓝-茜素红染色和微型CT观察小鼠全身骨骼的发育情况。结果 E8.5、E13.5、E14.5、E15.5给药组胎鼠未见明显畸形,E11.5、E12.5给药组中出现较高比例的腭裂和舌体呈三角形。E9.5、E10.5给药组中发现胎鼠颅面形态发育异常,包括颅顶部发育异常、小下颌、舌体畸形,部分伴有腭裂与第一磨牙缺失,而且还伴发缺指（趾）畸形,与口下颌-肢体发育不全综合征的临床表现极相似。E9.5给药组胎鼠的致死率[48%（20/42）]相对较高,因此选择E10.5给药组构建口下颌-肢体发育不全的动物模型较理想。结论在E10.5以150 mg/kg GDC-0449灌胃方式诱导胎鼠聘裂、小舌、小下颌及缺指（趾）畸形,是研究口下颌-肢体发育不全综合征的一种较理想的模型。