猪德尔塔冠状病毒M蛋白参与病毒诱导IL-8产生的研究

摘要

为研究猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染能否诱导宿主细胞产生IL-8,本研究将PDCoV分别感染猪小肠上皮细胞(IPEC)和ST细胞,感染后6 h、12 h和24 h收集细胞,通过荧光定量PCR方法检测IL-8 mRNA转录水平。构建表达PDCoV M蛋白的真核表达质粒pCAGGS-M,经测序鉴定无误后转染HEK 293T细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot方法检测PDCoV M蛋白的表达。将pCAGGS-M质粒转染IPEC细胞,采用荧光定量PCR方法检测PDCoV M蛋白对IL-8转录的影响。为进一步评价PDCoV M蛋白对IL-8转录水平的影响,将不同浓度pCAGGS-M质粒(10 ng、100 ng和200 ng)、IL-8启动子质粒和pRL-TK质粒共转染HEK 293T细胞,采用双荧光素酶活性分析试验评价PDCoV M蛋白对IL-8转录活性的影响。荧光定量PCR结果显示,与未感染组相比,PDCoV感染能够显著上调细胞中IL-8 mRNA转录水平,其中PDCoV感染IPEC细胞6 h、12 h和24 h后IL-8 mRNA分别上调3倍、37倍和173倍;PDCoV感染ST细胞6 h、12 h和24 h后IL-8 mRNA分别上调20倍、19000倍和48000倍。IFA和western blot结果显示PDCoV M蛋白正确表达,与空载体质粒转染组相比,转染表达PDCoV M蛋白的质粒能够上调IPEC细胞IL-8转录水平约4.3倍。双荧光素酶活性分析试验结果显示,与对照组相比,转染10 ng、100 ng和200 ng pCAGGS-M质粒能够分别诱导细胞中IL-8转录活性上调1.9倍、3.8倍和5.7倍;表明PDCoV M蛋白能够上调宿主细胞IL-8的转录活性。综上所述,PDCoV感染能够显著上调IPEC和ST细胞中IL-8的转录水平,其中PDCoV M蛋白参与诱导细胞IL-8的产生,本研究为深入了解PDCoV致病机制提供参考依据。