环形泰勒虫SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立及应用

摘要

为建立一种快速、敏感检测牛环形泰勒虫的方法,本研究根据GenBank中登录的牛环形泰勒虫Tams1基因序列,设计合成1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测牛环形泰勒虫SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.研究结果显示,该方法可以特异地检测牛环形泰勒虫,而对牛巴贝斯虫、反刍动物艾立希体和弓形虫检测均为阴性;该方法的灵敏度可达到180拷贝/μL,比常规PCR敏感10倍;组内和组间变异系数均小于1.0％.对15份临床血液样品和20只璃眼蜱进行检测,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和常规PCR的阳性检出率分别为42.86％和28.57％.本研究建立的SYBR G-reen Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高的特点,可准确、高效检测牛环形泰勒虫,为牛环形泰勒虫病防控提供技术支持.