人真皮成纤维细胞体外构建组织工程化软骨的初步探索

摘要

目的利用软骨细胞提供的体外软骨诱导微环境,探讨人真皮成纤维细胞在体外构建软骨的可行性。方法分别培养猪的软骨细胞与人真皮成纤维细胞,将2种细胞按1:1（软骨细胞:成纤维细胞）比例混匀,以5.0×107/ml的终浓度接种于聚羟基乙酸支架（PGA,直径9mm,高2mm）作为共培养组,相同终浓度的单纯软骨细胞和单纯成纤维细胞分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照。每组各接种3个标本,每个接种细胞悬液200μl。全部标本均于体外培养8周后取材,通过大体观察、湿重测定、组织学及免疫组化等相关检测对构建软骨进行评价。结果软骨细胞组（阳性对照组）基本保持了复合物初始的大小和形状,组织周边和中央均有较均质的软骨陷窝样结构形成,表达软骨特异性细胞外基质;共培养组的组织稍有缩小,组织周边也有软骨陷窝样结构形成,表达软骨特异性细胞外基质,但组织内大部分区域形成了纤维样组织,特别是通过人核抗原免疫组化和对应的SafraninO染色结果,可以看到少量人核抗原阳性的细胞形成了较成熟的陷窝样结构,表达软骨特异性基质。单纯成纤维细胞组（阴性对照组）在体外培养过程中逐渐皱缩变形,未形成软骨样组织。结论软骨细胞共培养体系可以有效地诱导人真皮成纤维细胞中一定比例的细胞向软骨分化,并能在体外构建软骨样组织。