高效液相色谱法测定猕猴血浆中的风车子素A-4及其磷酸酯

摘要

目的:建立风车子素A-4(CA4)及其磷酸酯(FR-1)在血浆样品中的高效液相色谱测定方法.方法:样品加乙腈沉淀蛋白后,离心并取上清,氮气流吹干,加50μL流动相溶解,取40 μL进样.保护柱:Waters公司Symmetry C18(5μm,20mm×3.9 mm);分析柱:Waters公司Symmetry C18(5 μm,150 mm×4.6 mm),流动相A:70 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 4.5)-甲醇-乙腈(65:25:10),流动相B:3.5 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.0)-甲醇-乙腈(30:60:10),分离条件:0～15 min,100%A;15～25 min,100%A～100%B;25～32 min,100%B～100%A.流速:1 mL·min-1,紫外检测波长为275 nm,在所用液相条件下同时分离顺式、反式CA4和FR-1这4种化合物.结果:FR-1和CA4的血浆浓度在0.5～50μg·mL-1范围内线性关系良好,相关系数在0.9963-0.9985之间.血浆样品最低定量浓度为0.5μg·mL-1.FR-1和CA4平均回收率分为84.9%和84.8%.CA4及FR-1分离良好.结论:该检测方法简便、准确、专属性强,能够满足猕猴药代动力学研究的需要.