应用CE-LIF方法分析重组人1型单纯疱疹病毒的DNA限制酶酶切片段

摘要

目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒(rHSV-1)的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBR^TM Gold nucleic acid作为荧光标记物,利用CE-LIF实现分离检测,通过DNA ladder计算片段大小。CE-LIF条件:采用涂层毛细管(有效长度30 cm,总长度40 cm,内径100μm),3.45 kPa压力进样3 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-7 kV,分离时间40 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法可以对8个目标酶切片段分离检测,各片段峰迁移时间的RSD(n=6)均小于0.35%,片段峰1~7校正峰面积百分比的RSD(n=6)均小于5.6%,方法精密度良好。通过DNA ladder回归方程,对DNA酶切产物进行片段大小的计算,各片段大小计算结果RSD(n=6)均小于5.8%,且与琼脂糖凝胶电泳法测得结果相一致。结论:本研究建立的rHSV-1的DNA限制酶酶切片段CELIF分析法自动化程度高,灵敏度高,重复性好,试剂消耗及环境污染小,适用于rHSV-1的鉴别分析。