三羟异黄酮对雌二醇和双酚A促神经母细胞瘤细胞增殖的抑制作用

摘要

目的观察大豆异黄酮类物质4′,5,7,-三羟异黄酮（genistein,GEN）对17β-雌二醇（E2）和双酚A（BPA）诱导的神经母细胞瘤细胞增殖作用的影响。方法 SK-N-SH细胞经常规培养扩增后分为6组:组1,RPMI1640无酚红培养液加无水乙醇（对照组）;组2,加GEN（12.5μmol/L）;组3,加E2（2μmol/L）;组4,同时加E2和GEN;组5,加BPA（8μmol/L）;组6,同时加BPA和GEN。分别在24 h、48 h和72 h进行光吸收度（A值）检测,72 h时用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡亚二倍体峰;末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记（TLUNEL）法检测细胞凋亡以及Western blot检测磷酸化Akt和总Akt蛋白表达。结果 48 h和72 h时,组3、5与组1比较,细胞A值有增加（P＜0.01）。48 h和72 h时组4与组3比较,组6与组5比较,细胞A值却降低（P＜0.01）。48 h时,组4的A值较组3降低10%,组6较组5降低13%（P＜0.01）;72 h时,组4较组3的A值下降17%,组6较组5的A值下降22%（P＜0.01）。72 h时,组4的G2/M期细胞百分比是组3的1.78倍,组6是组5的1.49倍（P＜0.01）。72 h时,各组磷酸化Akt表达有所不同,GEN干预组的磷酸化Akt光密度值较未干预组有下降。其中,组2的磷酸化Akt表达较对照组下降近15%;组4的磷酸化Akt表达分别较组3下降约11%;组6的磷酸化Akt表达较组5也有下降（均P＜0.01）;各组的总Akt蛋白表达未见明显差异。同样,各组的细胞凋亡未见统计学差异。结论 4′,5,7,-三羟异黄酮可抑制17β-雌二醇和双酚A促神经母细胞瘤细胞体外增殖的作用,该作用可能与G2/M期细胞周期阻滞及PI3K/Akt信号转导通路异常有关。