PKCα对脂多糖诱导的C57BL/6J小鼠急性肺损伤中细胞自噬及焦亡的调节作用

摘要

目的:探讨蛋白激酶Cα(PKCα)在脂多糖(LPS)诱导的C57BL/6J小鼠急性肺损伤中的作用及PKCα对小鼠肺损伤过程中细胞自噬及焦亡的调控.方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、DMSO组、DMSO+calphostin C组、LPS组和LPS+DMSO+calphostin C组,每组9只.按0.15 mg/kg剂量腹腔注射calphostin C预处理小鼠4 h以抑制PKCα的活化.将LPS以10 mg/kg的剂量经口气管插管滴入小鼠气道刺激24 h后收取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织标本.BALF检测蛋白浓度及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平;肺组织HE染色后进行肺损伤病理学评分;通过Western blot及免疫组化染色检测肺组织自噬相关蛋白及NLRP3炎症小体相关蛋白的表达.体外实验中,用calphostin C(100 nmol/L)预处理RAW264.7细胞2 h后予LPS(1 mg/L)刺激6 h及24 h,分别提取细胞蛋白及RNA,Western blot检测自噬相关蛋白(LC3B和p62)及细胞焦亡相关蛋白(NLRP3、cleaved caspase-1、caspase-1和ASC)表达水平,RT-qPCR检测NLRP3炎症小体相关mRNA水平.结果:在LPS诱导的小鼠急性肺损伤中,PKCα磷酸化水平上调(P<0.05);抑制PKCα后LPS诱导的肺损伤病理学改变及肺内炎症反应显著减轻(P<0.01),细胞自噬及焦亡水平显著下调(P<0.01).在RAW264.7细胞中,抑制PKCα也可部分逆转LPS诱导的细胞自噬及焦亡活性(P<0.05).结论:抑制PKCα对LPS诱导的急性肺损伤C57BL/6J小鼠发挥保护作用,其保护机制涉及PKCα-自噬/焦亡信号通路.