多靶点抑制剂西奥罗尼增强人胶质瘤细胞放射敏感性的机制

摘要

目的:探索多靶点抑制剂西奥罗尼对人胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制.方法:利用CCK-8实验和集落形成实验测定西奥罗尼对人胶质瘤U251细胞和T98G细胞增殖能力的影响.进一步,对U251细胞和T98G细胞进行药物和(或)X射线处理,设对照组、西奥罗尼(2.5μmol/L)组、4 Gy辐照组和西奥罗尼(2.5μmol/L)联合4 Gy辐照组,流式细胞术检测4组细胞的细胞周期和凋亡变化;通过Western blot检测4组细胞周期和凋亡关键蛋白的表达量;通过免疫荧光实验,探索西奥罗尼联合辐照对DNA损伤和修复的影响;最后通过Western blot检测DNA损伤修复关键蛋白的表达量.结果:与对照组相比,西奥罗尼显著抑制U251细胞和T98G细胞的增殖,半数抑制浓度(IC50)分别为7.773μmol/L和24.68μmol/L;随着X射线剂量的增加,细胞存活率在X射线辐照组和联合组中均显著降低,并且联合组在不同射线剂量的细胞存活率均低于单独辐照组,西奥罗尼的辐射增敏比(SER)分别为1.387和1.384.U251细胞对照组、西奥罗尼(2.5μmol/L)组、4 Gy辐照组和西奥罗尼(2.5μmol/L)联合4 Gy辐照组中处于G2/M期的细胞比例分别为(17.68±0.98)％、(18.93±0.03)％、(16.31±0.58)％和(23.96±1.18)％;4组细胞的总凋亡率分别为(8.04±0.24)％、(17.04±0.75)％、(9.34±0.50)％和(21.22±0.38)％.T98G细胞对照组、西奥罗尼(2.5μmol/L)组、4 Gy辐照组和西奥罗尼(2.5μmol/L)联合4 Gy辐照组中处于G2/M期的细胞比例分别为(2.05±0.71)％、(5.70±0.34)％、(5.14±0.33)％和(6.54±0.13)％;4组细胞的总凋亡率分别为(11.35±0.39)％、(13.23±0.18)％、(17.43±0.30)％和(21.32±0.64)％.免疫荧光实验发现,在30 min,γH2AX荧光灶点在单纯辐照组和联合组中均十分明显,并且联合组的荧光强度更强;在6 h和24 h,γH2AX荧光灶点在X射线辐照组中逐渐减少,而在联合组中可以观察到γH2AX的荧光强度依然较强.结论:西奥罗尼通过诱导G2/M期阻滞、促进凋亡、诱导DNA损伤及延迟DNA修复来增强人胶质瘤细胞的放射敏感性.