谷氨酸调节耳蜗内毛细胞游离钙的实验观察

摘要

目的　探索谷氨酸 (glutamate,Glu)对离体耳蜗内毛细胞 (innerhaircells ,IHC)内钙信号的调控作用及其生理病理意义。方法　在激光共聚焦显微镜下用钙敏荧光探针Fluo 3作为指示剂 ,观察外源性谷氨酸对分离的 10个豚鼠耳蜗IHC胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。结果　分离好的正常IHC呈烧瓶形状 ,有明显的颈部 ,皮板上可观察到静纤毛 ,大球形的细胞体中间可见圆形的细胞核。形态完好的IHC大约存活 2h ,Fluo 3钙敏荧光探针染色后IHC胞体、胞核及表皮板有明显的染色梯度 ,表明游离Ca2 + 浓度从细胞核向细胞质逐渐减少。终浓度为 3.85 μmol L的Glu对游离IHC内 [Ca2 + ]i 有增高趋势 ,而对游离外毛细胞 (outerhaircells ,OHC)内 [Ca2 + ]i 浓度无影响。观察 10个IHC ,发现 9个 [Ca2 + ]i浓度增加 ,1个无变化 ;观察 10个OHC ,发现 7个 [Ca2 + ]i无变化 ,3个略有下降。当Glu浓度增高后 ,IHC内 [Ca2 + ]i 先是迅速升高 ,继而逐渐下降。IHC外形由烧瓶状逐渐变成球形 ,提示IHC水肿变性。结论　Glu可选择性调控IHC内 [Ca2 + ]i,而对OHC内 [Ca2 + ]i 无影响 ,而过量的Glu刺激 ,可造成IHC [Ca2 + ]i 的堆积 ,从而IHC水肿变性。