IGF-1和bFGF对藻酸盐微球中兔耳弹性软骨细胞增殖活性和基质合成的影响

摘要

目的利用藻酸盐微球体外培养兔耳弹性软骨细胞,观察IGF-1和bFGF对细胞增殖和基质合成的影响及协同作用效果.方法酶消化法从兔耳获取软骨细胞,与1.2%藻酸钠混合,细胞浓度107/mL,经注射器滴入102mM的CaCl2溶液,形成软骨细胞/藻酸钙凝胶微球,用含10%FBS的DMEM培养液体外培养,对照组不加生长因子,实验A、B和C组分别加入25ng/mLIGF-1、50ng/mL bFGF和25ng/mLIGF-1+50ng/mL bFGF,14d后终止培养,采用生物化学方法分析微球中的细胞DNA和GAG总量.结果对照组、IGF-1组、bFGF组和IGF-1+bFGF组单个微球的DNA总量分别为3.5μg、3.6μg、6.6μg和6.2μg,统计分析结果显示IGF-1组的DNA含量与对照组之间、bFGF组和IGF-1+bFGF组之间没有明显差异,而IGF-1+bFGF组与对照组、IGF-1组之间均有明显差异,DNA含量明显增加.GAG含量为15.5μg、23.8μg、29.0μg和38.9μg,各实验组与对照组及各组之间均有显著差异.结论IGF-1和bFGF对软骨细胞的影响体现在不同方面,IGF-1可以提高细胞的GAG合成总量,但并不促进软骨细胞的增殖,而bFGF的作用主要体现在细胞的增殖方面,IGF-1和bFGF联合应用的协同作用效果明显好于因子的单独应用,细胞增殖明显增加,GAG的含量也明显增加,表明不同生长因子的联合应用可能会产生更为理想的软骨形成条件.