建立小鼠角膜植片慢性失功模型的初步探讨

摘要

目的探讨建立小鼠角膜植片慢性失功（CCAD）的模型。方法实验研究。将雄性C57BL/6小鼠与雌性BALB/c小鼠杂交,获得抗原半相合CB6F1代（即F1代）小鼠。分别以C57BL/6（异系）、F1代、BALB/c小鼠（同系）为供体,以BALB/c小鼠为受体,建立免疫背景渐同的小鼠穿透性角膜移植（PK）模型,BALB/c小鼠为正常对照组。PK术后体外对植片进行观察;采用茜素红联合碘化丙啶（PI）/Hoechst双标法观察角膜内皮细胞形态、凋亡与坏死情况;免疫组织化学法检测各组植片CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润情况;电镜观察各组角膜片超微结构改变,筛选与临床接近的CCAD模型。生存曲线之间比较采用Log-rank检验。结果 （1）角膜植片观察:异系、F1代、同系和对照组小鼠发生混浊时间的中位数分别为17.0 d、85.5 d、＞100 d及＞100 d（F=344.0,P＜0.01）。（2）免疫组织化学检查:异系移植组植片基质中见大量CD4+ T淋巴细胞浸润,较多CD8+ T淋巴细胞浸润;F1代移植组和同系移植组术后偶见CD4+ T淋巴细胞浸润,未见CD8+ T淋巴细胞浸润。（3）茜素红联合PI/Hoechst检查:发现异系移植组有较多坏死和凋亡的内皮细胞;F1代移植组内皮细胞减少,可见散在凋亡内皮细胞,未见坏死内皮细胞;同系移植组角膜内皮细胞较正常减少,偶见凋亡内皮细胞,未见坏死内皮细胞。（4）透射电镜检查:各移植组小鼠角膜植片内皮细胞均存在萎缩性改变,异系移植组角膜基质内可见较多炎性细胞;F1代和同系移植组未见明显炎性细胞浸润。结论 PK术后F1代移植组与同系移植组植片出现与临床慢性失功相似的变化过程,可作为研究CCAD的动物模型。