鞘氨醇激酶1调控p38和c-Jun氨基末端激酶通路影响结肠癌HT-29细胞的凋亡迁移与侵袭

摘要

目的探讨鞘氨醇激酶1（SphK1）对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）和N,N-二甲基鞘氨醇（DMS）诱导和抑制人结肠癌HT-29细胞SphK1的活化和表达,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测SphK1的活性,Western blot检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 PMA和DMS能分别诱导和抑制SphK1活性和表达,在24 h内呈一定的时间依赖性。PMA能抑制细胞的凋亡,100 nmol/L PMA作用0、6、12、24 h后,细胞凋亡率分别为（9.35±0.84）%、（7.61 40.48）%、（5.53±0.76）%和（0.56±0.33）%。DMS能显著抑制细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,50μmol/L DMS作用0、6、12、24 h后,细胞凋亡率分别为（9.18±0.94）%、（12.06±1.41）%、（19.80±2.36）%和（31.85±3.60）%。对照组、PMA组和DMS组的迁移细胞数分别为68.75±6.15、109.33±11.63和10.83±2.48,侵袭细胞数分别为55.42±4.50、90.58±7.06和9.58±2.39,与对照组比较,PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多,而DMS组则显著减少。对照组、PMA组和DMS组的p38表达强度分别为0.20±0.03、0.08±0.02和0.31±0.03,磷酸化p38（p-p38）表达强度分别为0.19±0.02、0.09±0.02和0.38±0.05,应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶（SAPK/JNK）的表达强度分别为0.26±0.03、0.12±0.03和0.43±0.06,PMA显著抑制p38、p-p38和SAPK/JNK蛋白的表达,而DMS则促进p38、p-p38和SAPK/JNK蛋白的表达。结论、SphK1可促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并抑制细胞的凋亡,其机制可能是通过抑制p38和SAPK/JNK通路而发挥作用。