HT22细胞糖氧剥夺/复氧模型建立条件的优化研究

摘要

目的优化小鼠海马神经元HT22细胞糖氧剥夺/复氧模型的建立条件,探讨该模型建立的依据并测定相关指标。方法首先通过细胞计数法绘制HT22细胞的生长曲线并计算该细胞的倍增时间。其次,采用乳酸脱氢酶（LDH）细胞活性实验确认模型最佳的糖氧剥夺时长和复氧时长。最后,用CCK-8细胞活性实验、细胞计数法、细胞形态学观察以及流式细胞仪凋亡检测方法进一步确定模型建立的条件。结果 HT22细胞的倍增时间为17 h 18 min。最佳模型的糖氧剥夺时长为18 h,复氧时间长为20 h。CCK-8检测结果显示,糖氧剥夺18 h/复氧20 h（OGD18 h/R20 h）细胞吸光度值为0.334±0.138,对照组细胞吸光度值为0.756±0.026,差异有统计学意义（P＜0.05）。在形态学方面,OGD18 h/R20 h细胞明显发生皱缩。流式细胞仪凋亡检测结果显示,OGD18 h/R20 h细胞中凋亡晚期和坏死细胞分布比例为24.56%±5.76%,早期凋亡细胞2.63%±0.55%,对照组细胞中凋亡晚期和坏死细胞分布比例为8.13%±0.87%,早期凋亡细胞0.80%±0.10%,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 HT22细胞糖氧剥夺/复氧模型的糖氧剥夺时长和复氧时长与细胞的倍增时间有关,糖氧剥夺18 h后复氧20 h可较好实现建模要求。