实验性脑脓肿组织中G蛋白信号系统相关基因的克隆

摘要

目的筛选和克隆实验性脑脓肿的早期相关基因,研究脑组织对病原菌的免疫反应过程中所涉及的分子机制. 方法通过脑组织内直接注射金黄色葡萄球菌获得大鼠脑脓肿,利用mRNA荧光差异显示PCR技术比较脑脓肿组脑组织中mRNA的表达与正常对照组、手术对照组之间的差异,获得的差异表达cDNA片段经克隆、测序及BLAST软件进行同源性比较分析,并采用Northern杂交和RT-PCR进行鉴定. 结果共获得25条差异表达的cDNA条带,经Northern杂交和RT-PCR鉴定其中17条为阳性(阳性率为68%).克隆和测序结果显示其中3个差异表达片段与G蛋白相关的细胞信号传导系统有关:片段G18-1代表的鸟苷二磷酸解离抑制因子3(GDI3)、片段G20-1代表的交集素(ITSN)以及片段C2-1代表的Ras相关蛋白(Rap1). 结论在实验性脑脓肿早期GDI3、ITSN和Rap1差异表达,推导G蛋白信号系统的激活可能与脑脓肿的发病相关.