乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白致HepG2细胞凋亡的蛋白质组学分析

摘要

目的研究乙型肝炎病毒（hepatitits B virus,HBV）表面抗原大蛋白（large envelopeprotein,LHB）对HepG2细胞凋亡的影响,并以蛋白质组学方法探讨其机制。方法以腺病毒表达载体pShuttle-IRES-hrGFP-1克隆HBV LHB基因,经重组、包装后获得重组腺病毒Ad-LHB,与空载体重组腺病毒Ad-GFP分别感染HepG2细胞,采用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒、JC-1细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡情况。Ad-LHB及Ad-GFP分别感染HepG2细胞,提取细胞总蛋白,各取600μg蛋白样品进行双相电泳,R350染色,以双相电泳图像分析软件ImageMaster 2D Platinum确定差异蛋白点,Ettan斑点自动挖胶系统切取差异蛋白,脱色酶解后进行MALDI-TOF-TOF MS鉴定并分析。结果 Ad-LHB感染导致HepG2细胞凋亡明显增加。双向电泳及扫描分析显示Ad-LHB与Ad-GFP感染的HepG2细胞共有39个蛋白差异。质谱分析并确定其中的33种共36个蛋白,这些差异蛋白质有9种与细胞凋亡密切相关,其中,CAPN2、eIF3K和PPP2CB在Ad-LHB感染HepG2细胞表达增高,SERPINH1、LASP1、PRDX1、DHRS2、LDHA和PSMA4在Ad-LHB感染HepG2细胞表达降低。结论 HBV LHB可致HepG2细胞凋亡,多种细胞凋亡相关蛋白参与此过程。