分枝杆菌同源可控表达系统的建立及其应用

摘要

目的构建分枝杆菌可控表达载体,利用其过表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tu-berculosis,Mtb）的免疫保护性抗原,亲和层析纯化后分析免疫原性.方法应用PCR扩增耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis,Ms）乙酰胺酶编码基因启动子（pACE）,构建分枝杆菌可控表达载体pMF系列;克隆Mtb嵌合抗原编码基因并用乙酰胺进行诱导表达,以Ni～（2+）亲和层析纯化重组蛋白;并用该重组嵌合抗原Ag856A2对卡介苗（BCG）免疫的小鼠脾细胞进行体外刺激,以IFN-γ酶联免疫斑点技术（ELISPOT）分析其免疫原性.结果成功构建了分枝杆菌可控表达载体pMF系列,利用0.02%乙酰胺进行诱导可实现目标抗原在Ms中的高水平表达;同时利用引入的6×His标签可方便实现重组抗原的一步纯化,且该同源表达重组抗原可诱导更高水平IFN-γ的分泌.结论以Ms乙酰胺酶编码基因启动子pACE为基础构建的分枝杆菌可控表达系统可实现Mtb抗原在Ms中的高水平表达与纯化,与大肠杆萧异源表达相比,该同源表达重组抗原具有更好的免疫原性。