套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用

摘要

目的建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)快速检测黄热病毒方法.方法参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的套式RT-PCR快速检测黄热病毒方法,并以同属于黄病毒科的登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性.结果外引物扩增可获得404 bp左右的特异性扩增片断,阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断,但可见非特异性片断;内引物扩增可获得349 bp左右片断,阴性对照无扩增条带.结论套式RT-PCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒.